利用雙向推拉注射泵進行微流控實驗研究：技術(shù)方案與應(yīng)用實踐

一、雙向推拉注射泵核心特性與微流控適配優(yōu)勢

（一）核心技術(shù)特性

（二）微流控實驗適配優(yōu)勢

1. 突破單向傳輸局限：無需手動切換管路即可實現(xiàn)流體反向流動，解決微流控芯片通道堵塞（反向沖洗）、細胞動態(tài)灌注（營養(yǎng)循環(huán)）等核心需求，操作效率提升 10 倍以上；

2. 多相流精準協(xié)同：雙通道獨立控制推 - 拉流速，可實現(xiàn)兩種流體 1:1000 內(nèi)任意比例混合，避免微流控多相流界面偏移，混合均勻性 RSD≤0.8%；

3. 低擾動流體傳輸：采用脈沖消除技術(shù)與細分步進電機（最小步長 0.039μm），流體輸出平穩(wěn)無脈動，減少對敏感樣品（如細胞、生物大分子）的機械損傷；

4. 復(fù)雜程序自定義：支持 15 段以上雙向流量編程，可設(shè)置梯度流速、循環(huán)周期、延時觸發(fā)等參數(shù)，適配微流控動態(tài)反應(yīng)（如濃度梯度生成、周期性流體刺激）。

二、微流控實驗典型應(yīng)用場景與技術(shù)方案

（一）微流控芯片細胞灌注培養(yǎng)（3D 類器官 / 貼壁細胞）

1. 應(yīng)用痛點

2. 技術(shù)方案

• 設(shè)備選型：雙通道雙向推拉注射泵（如貝塔 RSP02-C），適配 5mL 塑料注射器（培養(yǎng)液）與 1mL 玻璃注射器（緩沖液）；

• 參數(shù)設(shè)置：采用 “往復(fù)循環(huán)模式"，推速 100μL/min、拉速 100μL/min，循環(huán)周期 5 分鐘，通道壓力上限設(shè)定 2kPa（避免芯片破裂）；

• 系統(tǒng)集成：通過 PEEK 管路連接微流控芯片培養(yǎng)腔，注射器出口加裝微型過濾器（0.22μm），防止顆粒污染通道；

3. 實驗效果

（二）膜式微流控低溫保護劑（CPAs）添加 / 去除

1. 應(yīng)用痛點

2. 技術(shù)方案

• 設(shè)備選型：雙通道雙向推拉注射泵（如蘭格 LSP02-1B），搭配膜式微流控芯片（三明治結(jié)構(gòu)，內(nèi)置微孔濾膜）；

• 參數(shù)設(shè)置：

• CPA 添加：上通道（CPAs 溶液）推速 5μL/min，下通道（細胞懸液）拉速 5μL/min，通過跨膜傳質(zhì)實現(xiàn)濃度平穩(wěn)上升；

• CPA 去除：上通道（置換液）推速 8μL/min，下通道（含 CPAs 細胞液）拉速 8μL/min，梯度降低滲透壓；

3. 實驗效果

（三）微流控液滴生成與多相反應(yīng)控制

1. 應(yīng)用痛點

2. 技術(shù)方案

• 設(shè)備選型：四通道雙向推拉注射泵（如 ExiGo 微流體泵），支持 iPad/PC 遠程控制，響應(yīng)時間低至 50ms；

• 參數(shù)設(shè)置：

• 連續(xù)相（油相）：通道 A 推速 10μL/min；

• 分散相（水相試劑）：通道 B 推速 2μL/min，通過 “同步推 - 拉" 模式維持流速比 5:1；

• 反應(yīng)調(diào)控：需終止反應(yīng)時，通道 C 推速 3μL/min 注入淬滅劑，通道 B 同步抽吸（拉速 2μL/min）停止分散相供應(yīng)；

3. 實驗效果

（四）微流控核酸檢測與數(shù)字 PCR 芯片供液

1. 應(yīng)用痛點

2. 技術(shù)方案

• 設(shè)備選型：單通道雙向推拉注射泵（如貝塔 RSP02-B），適配 10μL 玻璃微量注射器；

• 參數(shù)設(shè)置：采用 “低速推注 + 反向回吸" 模式，推速 0.5μL/min（避免湍流產(chǎn)生氣泡），每填充 1 個芯片單元后回吸 0.1μL（消除管路死體積）；

• 操作要點：提前用 PCR 反應(yīng)液潤洗管路與注射器，排盡氣泡，通過軟件編程實現(xiàn) 384 孔微腔精準分液；

3. 實驗效果

三、微流控實驗系統(tǒng)集成與參數(shù)優(yōu)化

（一）系統(tǒng)集成關(guān)鍵步驟

1. 管路與芯片適配：

• 選用內(nèi)徑 0.1-0.5mm 的 PTFE 或 PEEK 管路（低吸附、耐腐蝕），減少流體滯留與樣品損失；

• 采用魯爾接頭或微型 barb 接頭連接注射器與芯片，確保密封性能，避免微流泄漏；

2. 氣泡排除流程：

• 注射器吸液后垂直放置，輕彈管壁排出氣泡；

• 啟動 “脈沖推注" 模式（小流量反復(fù)推 - 拉 3 次），清除管路與芯片通道內(nèi)殘留氣泡；

3. 雙向校準操作：

• 采用稱重法校準雙向流量：設(shè)定推 / 拉流速 1μL/min，收集 10min 流體，稱重后計算實際流量，偏差超 ±0.5% 時通過設(shè)備校準功能修正；

• 多通道協(xié)同校準時，需保證各通道流速比例誤差≤±0.3%，避免微流場失衡。

（二）不同場景參數(shù)優(yōu)化指南

四、操作注意事項與故障排查

（一）核心操作規(guī)范

1. 注射器安裝時需確保推桿與驅(qū)動模塊緊密貼合，避免空程導致流量誤差；雙向模式切換前需排空管路內(nèi)殘留流體，防止樣品交叉污染；

2. 長時間微流控實驗（>8h）需啟用 “掉電記憶" 功能，并定期檢查管路密封性，避免流體蒸發(fā)或泄漏影響實驗；

3. 處理生物樣品（細胞、核酸）時，注射器與管路需經(jīng) 75% 乙醇消毒，實驗后用超純水反向沖洗 3 次，晾干備用。

（二）常見故障排查

五、應(yīng)用拓展與未來趨勢