分子生物學(xué)實驗室開展實時熒光定量 PCR（qPCR）檢測時，需對 96 孔板、384 孔板進(jìn)行批量樣品加樣，要求移液體積精準(zhǔn)（誤差≤±2%）、孔間重復(fù)性好（CV 值≤1%），同時需避免樣品交叉污染，保障擴(kuò)增結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。傳統(tǒng)單通道移液器單次僅能處理 1 個樣品孔，完成 96 孔板加樣需耗時 1 小時以上，人工操作強(qiáng)度大且易因手法差異導(dǎo)致孔間體積偏差；頻繁更換槍頭增加了樣品污染風(fēng)險，且移液效率低下，難以滿足高通量 qPCR 檢測需求。為解決上述痛點，引入 8 通道 / 12 通道可調(diào)式移液器，構(gòu)建 “標(biāo)準(zhǔn)化移液 - 批量加樣 - 防污染管控" 的 qPCR 樣品前處理體系，提升實驗效率與數(shù)據(jù)穩(wěn)定性。

方案選型與核心參數(shù)

選用適配 qPCR 實驗的8 通道 / 12 通道可調(diào)量程移液器，覆蓋移液體積范圍 0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL，滿足不同體系配制需求；移液器采用人體工學(xué)設(shè)計，配備輕量化手柄與防滑指托，降低長時間操作的手部疲勞；內(nèi)置量程鎖定裝置，防止移液過程中量程漂移；槍頭適配帶濾芯的無菌吸頭，有效阻隔氣溶膠污染，避免樣品間交叉污染；移液精度符合 ISO 8655 標(biāo)準(zhǔn)，小體積移液（10μL）精度 ±1.5%，大體積移液（100μL）精度 ±0.8%，孔間重復(fù)性 CV 值≤0.8%，可達(dá)到qPCR 實驗嚴(yán)苛要求。

針對 qPCR 實驗不同環(huán)節(jié)優(yōu)化移液參數(shù)：

• 反應(yīng)體系配制：采用 8 通道移液器，選擇 10-100μL 量程，低速吸液（吸液速度調(diào)至 2 檔）、勻速排液，避免槍頭內(nèi)產(chǎn)生氣泡，確保每個反應(yīng)孔體系體積一致；

• 樣品模板加樣：采用 12 通道移液器，選擇 0.5-10μL 量程，使用帶濾芯吸頭，每塊 96 孔板更換一次吸頭，防止模板氣溶膠污染；

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度稀釋：采用 8 通道移液器，配合排管架進(jìn)行批量梯度稀釋，減少人工稀釋誤差，提升標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)（R2≥0.999）。

實施流程標(biāo)準(zhǔn)化操作

1. 移液前預(yù)處理

• 移液器校準(zhǔn)：實驗前使用標(biāo)準(zhǔn)砝碼對移液器進(jìn)行校準(zhǔn)，確認(rèn)移液體積精度符合要求；

• 耗材準(zhǔn)備：將帶濾芯無菌吸頭裝入移液器吸頭盒，qPCR 反應(yīng)板、離心管置于超凈工作臺紫外滅菌 30 分鐘；

• 試劑預(yù)混：按 qPCR 反應(yīng)體系配方，將引物、探針、酶、緩沖液等試劑混合均勻，置于冰浴中備用，避免試劑反復(fù)凍融。

2. 批量加樣操作

• 反應(yīng)體系分裝：將 8 通道移液器量程調(diào)至目標(biāo)體積（如 20μL），吸取預(yù)混試劑后，垂直對準(zhǔn) 96 孔板的 8 個樣品孔，勻速排液至孔底，避免液體掛壁；完成一列后平移移液器，依次完成整板體系分裝，全程僅需 5 分鐘；

• 樣品模板加樣：將 12 通道移液器量程調(diào)至模板體積（如 5μL），吸取離心管中的樣品模板，對應(yīng)加入 qPCR 反應(yīng)板的樣品孔，加樣后輕彈反應(yīng)板側(cè)壁，使液體充分混合；

• 防污染管控：加樣過程中，移液器槍頭避免接觸反應(yīng)孔內(nèi)壁，每處理完一批樣品，及時更換吸頭并對移液器吸頭連接端進(jìn)行酒精擦拭消毒。

3. 移液后處理

• 反應(yīng)板密封：加樣完成后，使用 qPCR 專用封板膜密封反應(yīng)板，離心去除氣泡后放入 qPCR 儀；

• 移液器清潔：實驗結(jié)束后，用 75% 酒精擦拭移液器表面，拆卸吸頭彈射器進(jìn)行清潔，干燥后存放于移液器支架上。

方案實施后成效顯著

1. 移液效率大幅提升：完成一塊 96 孔板的加樣工作，從傳統(tǒng)單通道移液器的 60 分鐘縮短至 10 分鐘，效率提升 500%，日均可完成 10-15 塊 96 孔板的樣品前處理，滿足高通量 qPCR 檢測需求；

2. 實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定性優(yōu)化：孔間移液體積偏差從 ±5% 降至 ±1.5%，qPCR 擴(kuò)增曲線的孔間重復(fù)性 CV 值≤1%，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)穩(wěn)定在 0.999 以上，實驗結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性顯著提升；

3. 污染風(fēng)險有效降低：帶濾芯吸頭的使用配合嚴(yán)格的操作規(guī)范，使樣品交叉污染率從 8% 降至 0，杜絕氣溶膠污染導(dǎo)致的假陽性結(jié)果；

4. 操作強(qiáng)度顯著降低：人體工學(xué)設(shè)計的多通道移液器減少了手部操作頻次，降低了實驗人員的勞動強(qiáng)度，提升了實驗操作的舒適性與便捷性。